貨號：SLM M08011                  外觀：淡紅色粉末

儲存：2℃-8℃密封保存             保質(zhì)期:24個月

一.產(chǎn)品說明

　　貼壁細(xì)胞低血清培養(yǎng)基M08011（以下簡稱M08011)為成分明確培養(yǎng)基，不含任何動物來源組分，適用于多種貼壁細(xì)胞低血清培養(yǎng)和細(xì)胞維持。與常規(guī)培養(yǎng)基相比，M08011血清使用濃度為3-5%。從8-10%血清濃度，適應(yīng)到3-5%血清濃度一般需要4-5代，每代培養(yǎng)時間為48-72小時。使用低血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)略有不同，屬于正?，F(xiàn)象。

二.配制方法

　　1.將培養(yǎng)基粉末加入配置容器。

　　2.量取適量細(xì)胞培養(yǎng)用水于配制容器，攪拌15-20分鐘，使其完全溶解。

　　3.將NaHCO₃以2.44g/L的量加入培養(yǎng)液中，攪拌2-3分鐘，使其完全溶解。

　　4.使用1M NaOH或1M HCl調(diào)節(jié)培養(yǎng)液至所需pH，定容。

　　5.使用0.22μm孔徑濾膜或濾芯正壓過濾，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

三.使用M08011培養(yǎng)貼壁細(xì)胞的適應(yīng)方法

　　貼壁細(xì)胞培養(yǎng)通常使用公開配方的MEM或者DMEM進(jìn)行培養(yǎng)，使用血清濃度通常為8%-10%。如需要替換成M08011進(jìn)行培養(yǎng)，需要逐步降低血清用量。

　　不同來源的貼壁細(xì)胞株培養(yǎng)特性各有不同，馴化和適應(yīng)所需代次也有差異，最終使用的血清濃度也有不同。根據(jù)我們整理的信息，不同來源的貼壁細(xì)胞株基本上都能適應(yīng)4-5%血清濃度。

　　更低血清濃度的適應(yīng)也是可以成功的，但是由于個性化的培養(yǎng)基配方對細(xì)胞株有篩選作用，最終可能對細(xì)胞株的病毒敏感性和病毒產(chǎn)量有較大影響。為了使細(xì)胞株能一次性適應(yīng)成功，降低病毒抗原的生產(chǎn)成本，我們推薦客戶優(yōu)先使用4-5%的血清濃度進(jìn)行培養(yǎng)。

　　現(xiàn)介紹一種梯度降低血清的適應(yīng)方法：

　　準(zhǔn)備倍增正常、無外源污染的貼壁細(xì)胞株，使用常規(guī)MEM或者DMEM進(jìn)行培養(yǎng)，血清濃度為8-10%。

　　將細(xì)胞培養(yǎng)液完全替換為M08011，碳酸氫鈉添加量為2.44g/升，使用血清濃度為6%，以原有MEM或者DMEM培養(yǎng)的接種密度進(jìn)行接種，連續(xù)培養(yǎng)直至細(xì)胞倍增正常。

　　然后可以降低血清使用濃度至4%-5%，以原有MEM或者DMEM培養(yǎng)的接種密度進(jìn)行接種，連續(xù)培養(yǎng)直至細(xì)胞倍增正常。

　　使用適應(yīng)好的貼壁細(xì)胞株進(jìn)行病毒抗原生產(chǎn)，如病毒滴度不理想，可以將收獲的第一代病毒液進(jìn)行續(xù)傳，續(xù)傳三代以后，一般情況下，病毒毒價會恢復(fù)至正常水平。

　　將適應(yīng)好的貼壁細(xì)胞株保種，下次復(fù)蘇該細(xì)胞時，可以直接使用4%-5%血清濃度的M08011進(jìn)行培養(yǎng)。

四.部分客戶應(yīng)用情況