一.產(chǎn)品說明

　　1.本產(chǎn)品適用于豬肺炎支原體抗原生產(chǎn)，增菌效果好，亦可應用于菌種復蘇活化和CCU檢測。

　　2.本產(chǎn)品血清用量少，利于抗原純化，有助于減少疫苗的動物副反應。

二.配制方法

　　1.量取80%終體積的常溫純化水于攪拌容器。

　　2.開啟攪拌，將培養(yǎng)基粉未緩慢加入配制容器，攪拌30分鐘至粉末完全溶解定容。

　　3使用 NaOH 溶液將 pH 值調(diào)至7.8。

　　4.先使用 0.45 µ m 孔徑濾芯粗濾，再使用 0.22µ m 孔徑濾芯正壓過濾，過濾后2°C-8C避光保存。

　　5.不同濾膜材質(zhì)對培養(yǎng)基組分的截留情況不同，推薦使用PVDF材質(zhì)。

三.菌種復蘇、活化

　　1.菌種更換新的培養(yǎng)體系需要適應過程。為保證增菌效果，實驗前請使用支原體培養(yǎng)基Z1對菌種進行兩次以上活化傳代。使用支原體培養(yǎng)基Z1進行CCU₅₀檢測。

　　2.培養(yǎng)容器:優(yōu)選透氣瓶、裝液體積應不超過總體積的20%。

　　3.復蘇:將菌種按照10%體積比接種于含10%-20%豬血清的支原體培養(yǎng)基Z1中;于37°C，60rpm 振蕩培養(yǎng)至 pH 下降到7.0-6.8。

　　4.活化:將復蘇后的菌液按照10%體積比接種于含10%-20%豬血清的支原體培養(yǎng)基Z1中;于37°C，60rpm 振蕩培養(yǎng)至 pH 下降到7.0-6.8，作為種子液。

四.CCU₅₀檢測

　　1.稀釋液:含10%-20%豬血清的支原體培養(yǎng)基Z1。

　　2.稀釋和培養(yǎng):取數(shù)支已滅菌的 2mL EP管，分別加入0.9mL稀釋液備用，取 100µL 菌液加入含0.9mL稀釋液的EP管中，于渦旋混合器上震蕩混勻，依次進行10倍稀釋，在稀釋到10^-7~10^-10稀釋梯度時每個梯度做5個重復。另取空白培養(yǎng)基作為對照。將稀釋好的各管按順序排列并做好標記，用透明膠帶固定。37°C靜置培養(yǎng)14天。

　　3.CCU₅₀計算:距離比例=(高于50%的累計變色百分比一50%)÷(高于50%的累計變色百分比一低于50%的累計變色百分比)。

　　4.logCCU₅₀=距離比例×稀釋倍數(shù)的對數(shù)+變色占比≥50%對應的稀釋度。

表 1CCU₅₀檢測結(jié)果實例

Table 1Example of CCU₅₀ test results

　　5.與傳統(tǒng)的CCU檢測方法比較，CCU₅₀檢測方法分辨率更高，結(jié)果更加精確。

五.注意事項

　　1.為了保證增菌效果，請根據(jù)原有使用習慣添加血清、輔酶等添加物.

　　2.不同菌種來源，在相同培養(yǎng)基上也會表現(xiàn)出不同的生長速度，使用本產(chǎn)品時培養(yǎng)時間可能與原培養(yǎng)時間有所差異，更快或更慢都是正常表現(xiàn)。

　　3.首次試驗建議取 pH7.0、pH6.9、pH6.8進行CCU₅₀測定，以得到最適的收獲時間點。